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Geräte
HPLC/MS-MS
Die
Kombination HPLC/MS-MS ermöglicht die Auftrennung, die Identifizierung
und die Quantifizierung von chemischen Substanzen. Durch den Einsatz der
Triple Quadrupol Technik zeichnen sich die Messungen durch eine hohe Sensitivität,
Spezifität und Genauigkeit aus. Es können insbesondere polare
und/oder thermisch labile Moleküle in komplexen Matrices analysiert
werden. Derartige Bedingungen sind häufig auf dem Gebiet der Bioanalytik
anzutreffen.
Das Gerät setzt sich aus zwei Einheiten zusammen:
- HPLC
Pumpen: Series 200 Micro Pump [Perkin Elmer]
Autosampler: Series 200 Autosampler [Perkin Elmer]
UV/VIS-Detektor: 785 A [Perkin Elmer] - MS-MS
PE SCIEX API 2000 LC/MS/MS System [Perkin Elmer]
Das Gerät verfügt über eine Turbo Ion Spray-Ionenquelle,
in die der Analytstrom durch eine Hochspannungsnadel geleitet und dadurch
in Form von geladenen Tröpfchen in die Ionenquelle hinein vernebelt
wird. Durch den senkrecht zum Analytstrom eingeleiteten erhitzten Stickstoffstrom
aus einer Düse wird der Prozess der Verdampfung, verbunden mit sog.
Coulomb-Explosionen, unterstützt. Zur Zeit werden in unserem Arbeitskreis
mit Hilfe dieser Ionenquelle Messungen des DNA-Adduktes des Glycidamids
durchgeführt.
Alternativ wird die APCI-Ionenquelle (Atmospheric Pressure Chemical Ionization;
Heated Nebulizer Ion Source) verwendet, in welcher der Analytstrom in
einer erhitzten Quarz-Röhre vernebelt wird. Beim Passieren der Hochspannungsnadel
erfolgt zunächst eine Ionisation der Lösungsmittelmoleküle,
die anschließend durch Ladungsübertragung die Analytmoleküle
ionisieren. Mittels dieser äußerst schonenden Ionisierungsart
können labile Komponenten mit einer minimalen thermischen Zersetzung
detektiert werden. Diese Ionenquelle findet Verwendung bei Messungen der
Hämoglobin-Addukte von Acrylamid und Glycidamid.
GC/MS
Die Verwendung
eines massenselektiven Detektors im Anschluss an die Gaschromatographie
ermöglicht den spezifischen Nachweis und die Quantifizierung von
flüchtigen Substanzen. Das vorhandene Gerät verfügt über
die Möglichkeit zur EI/CI-Ionisation und besitzt ein PTV-Kaltaufgabesystem.
Durch die vollständig aus inertem Material bestehende Ionenquelle
können aktive Substanzen besonders sensitiv nachgewiesen werden.
Zur Zeit werden die Hämoglobin-Addukte von Acrylamid und Glycidamid
an diesem GC/MS-Gerät gemessen.
- GC: 6890 N Network GC System [Agilent Technologies]
- MS: 5973 inert Mass Selective Detector [Agilent Technologies]
Plattform zur Genexpressionsanalyse
ABI PRISM™ 6700/7900 HT
Die ABI
PRISM™ 6700 Automated Nucleic Acid Workstation dient als Plattform
zur Genexpressionsanalyse. Sie ist ein Robot-System, das zur vollautomatisierten
Nukleinsäureisolierung, zur Pipettierung von PCR-Reaktionen und zur
RNA-PCR-Umschreibung in cDNA eingesetzt werden kann. Das Gerät ist
kompatibel mit dem ABI PRISM® 7900HT Sequence Detection System.
Das ABI PRISM® 7900HT Sequence Detection System ist ein “high throughput” Real-time PCR System, das Nukleinsäure-Sequenzen detektiert und quantifiziert. Aufgrund auswechselbarer auf Peltier-Technik basierender Thermocyclerblöcke (96-well, 384-well Format) ist das Gerät flexibel und für einen hohen Probendurchsatz sehr gut geeignet. Der 7900HT wird eingesetzt für quantitative Genexpressionsanalysen und zum Nachweis von “Single Nucleotide“ Polymorphismen (SNPs) unter Verwendung des fluorogenen 5' Nuklease Assays. Eine kontinuierliche Detektion der Wellenlänge im Bereich von 500-660 nm ermöglicht den Einsatz von mehreren Fluorophoren in einer einzelnen Reaktion (Multiplex-PCR).
Lumi-Imager
Lumi-Imager™ F1 (Roche)
Mit
Hilfe des Lumi-ImagersTM können sowohl chemilumineszierende, als
auch fluoreszierende Proben in Form von Blots (Western, Southern, Northern
und Dot) oder Mikrotiterplatten detektiert und mittels Lumi-AnalystTM-Software
quantifiziert werden. Die Quantifizierung wird durch Einsatz einer Peltier-gekühlten
CCD-Kamera und ein speziell entwickeltes Linsensystem ermöglicht,
wobei eine Auflösung von 1280 x 1024 Pixeln erzielt wird. Die Quantifizierung
der Proben wird zusätzlich durch eine Kamera-Steuerungssoftware,
die automatisch eine Hintergrund- und Detektor-spezifische Korrektur vornimmt,
unterstützt. Aufgrund der fixierten Optik und des Autofokus ist eine
Fokussierung der zu detektierenden Proben durch den Anwender nicht mehr
notwendig. Im Falle der UV-Transillumination stehen 3 verschiedene Filter
zur Detektion von EtBr, SYBR-green und SYPRO-red zur Verfügung. Die
maximale Probenfläche beträgt im Falle der Chemilumineszenz
24 x 30 cm und bei Benutzung des Transilluminators 20 x 20 cm.
Momentane Anwendungen im Arbeitskreis von Prof. Dr. G. Eisenbrand:
- Detektion von Western Blots mittels Chemilumineszenz
- Detektion von EtBr-gefärbten Agarosegelen
Durchflusszytometer
Durchflusszytometer PAS III (Partec)Im Arbeitskreis von Prof. Dr. G. Eisenbrand werden mit Hilfe des PAS III- Durchflusszytometers hauptsächlich Zellzyklusuntersuchungen durchgeführt, um den Einfluss verschiedener Substanzen (Lebensmittelinhaltsstoffe, synthetische Naturstoffderivate etc.) auf die Zellzyklusverteilung von Tumorzellen zu bestimmen. Gleichzeitig können die Substanzen auf ihre Apoptose-auslösende Wirkung untersucht werden. Des Weiteren wird mit Hilfe des Durchflusszytometers überprüft, ob eine Arretierung der Tumorzellen in einer bestimmten Phase des Zellzykluses, was für bestimmte Versuche notwendig ist, erfolgreich war.
Ausführliche Beschreibung des Gerätes: PartecPAS.pdf (756 kB)
